Контроль микробиологической чистоты с помощью зонд-тампонов

Поверхности, подлежащие тестированию, должны быть очищены и продезинфицированы. Поверхности должны быть сухими, плоскими (по возможности), гладкими и достаточно большими для взятия проб. Не существует установленного единого требования для размера, который должен использоваться для отбора проб с поверхности. Однако рекомендуетсяиспользовать площадь не менее 20 см².

Когда берется мазок с поверхности, он обычно используется стерильный шаблон, чтобы очертить область, подлежащую мазку. Шаблоны могут быть одноразовыми из облученного пластика или из автоклавируемой стали, которые можно повторно использовать в течение многих лет. Стандартные площади шаблона составляют 50 см² и 100 см². Если образец необходимо проверить на наличие потенциального человеческого патогена, рекомендуется использовать как можно большую площадь поверхности. Нередко для тестирования Listeria monocytogenes на поверхностях, контактирующих с пищевыми продуктами, берут мазок площадью 1000 см².

Прежде чем решить, какой метод отбора проб подходит для поверхностей, контактирующих с пищевыми продуктами, необходимо рассмотреть тестируемый организм и причины тестирования. Лаборатории проводят два типа микробиологических исследований: качественные и количественные. Качественные тесты наиболее распространены в отношении патогенов человека, и обычно о них сообщается как о наличии, так и об отсутствии. Количественное тестирование сообщает о подсчете количества клеток, присутствующих в образце. В целом, различные подходы к тестированию зависят от того, насколько редки целевые бактерии. Человеческие патогены редко обнаруживаются, и попытку их найти сравнивают с «иголкой в стоге сена». Поскольку они редки, в процессе тестирования используется обогащение, чтобы попытаться обнаружить эти патогены. Обогащение предполагает использование питательной среды, которая позволяет размножать целевые бактерии, но ограничивает рост других нецелевых бактерий. Поскольку степень размножения целевых бактерий во время обогащения неизвестна, результаты сообщаются как присутствующие или отсутствующие. Чтобы помочь найти иголку в стоге сена, тесты на патогены обычно берут образцы с больших площадей, и поэтому может быть более целесообразным использовать губку, а не тампоны.

Количественное тестирование обычно (но не исключительно) используется для оценки эффективности уборки и санитарии. Подход заключается в оценке количества индикаторных бактериальных клеток. Используются различные индикаторы, и следует уделить внимание тому, какой индикатор является наиболее подходящим. В большинстве случаев подходящим индикатором является общее количество аэробных мезофилов (TCAM, также обычно называемое общим количеством жизнеспособных микроорганизмов [TVC] или, проще говоря, общим количеством). Использование TCAM в качестве индикатора является одним из самых дешевых тестов, предлагаемых испытательной лабораторией, если используется методология заливки.

Кроме того производители готовых к употреблению пищевых продуктов, которых могут представлять риск Listeria monocytogenes для здоровья населения, должны проверять производственные помещения и оборудование на наличие Listeria monocytogenes в рамках своих схема отбора проб, который может потребоваться учитывать для некоторых свежих продуктов. Для этого необходимо предусмотреть соответствующие меры для очистки и, при необходимости, дезинфекции рабочей посуды и оборудования. Не существует установленных законом критериев количества индикаторных бактерий на поверхностях в секторе свежих продуктов, хотя существуют некоторые ограничения, существующие в других пищевых отраслях, и они могут служить общим руководством для производителей при установлении своих собственных критериев.

Существует множество методик отбора проб с поверхностей,  и не существует общепринятого протокола, хотя существуют некоторые стандартные методики. Обычные методы включают использование губок, салфеток и ватных палочек для сбора проб. Влажно-сухая очистка зонд-тампоном является хорошо зарекомендовавшим себя методом сбора проб с поверхности окружающей среды и широко используется в пищевой промышленности для оценки качества очистки и дезинфекции. 

Для взятия пробы специалист должен носить перчатки. Правильно надетые перчатки помогают предотвратить загрязнение образцов бактериями с кожи человека, берущего отбор. Руки в перчатках следует тщательно продезинфицировать спиртовой салфеткой.

Для работы лучше всего использовать шаблон, стерилизованный в автоклаве или гамма-облучением. Однако если один и тот же шаблон используется для нескольких образцов, для очистки и дезинфекции шаблона между образцами можно использовать свежую спиртовую салфетку. Ножницы, которыми разрезают зонд-тампоны, также должны быть стерильными.

Следует позаботиться о том, чтобы шаблоны и другое используемое оборудование для отбора проб не подвергались повторному загрязнению. Помещение на это оборудования свежей спиртовой салфетки может помочь предотвратить повторное загрязнение, но перед использованием оборудование должно быть визуально сухим (т. е. не иметь пленки остаточного спирта).

Для взятия каждой пробы используются два тампона: один влажный и один сухой. Общая идея заключается в том, что влажный тампон покрывает поверхность, с которой берутся образцы, и обеспечивает жидкую фазу, в которую могут переместиться клетки с поверхности. Нанесенную жидкость, содержащую бактерии, затем вытирают сухим тампоном.

Стерилизованный шаблон следует крепко взять в руки и положить на поверхность, с которой будет проводиться тампон. Тампоны следует держать между пальцами и большим пальцем, чтобы вращать их во время взятия пробы.

Влажным тампоном следует тщательно протереть (вращаясь) участок внутри шаблона. Растирание должно быть в трех направлениях; горизонтально, затем вертикально, затем по диагонали.

Затем влажный тампон удерживается, а второй, сухой, используется для вытирания жидкости. Сухой тампон также раскатывается по мере протирания области внутри шаблона так же, как и влажный тампон, используя горизонтальный, вертикальный и диагональный рисунок. Сухой тампон должен собрать всю остаточную влагу, оставшуюся на поверхности влажным тампоном.

После чего концы обоих тампонов отрезаются (или ломаются) в трубку с раствором пептонной воды. Некоторые типы нейтрализаторов также можно использовать в качестве среды для транспортировки в испытательную лабораторию.

Влажный тампон погружают в нейтрализатор минимум на 10 секунд. Второй сухой тампон следует хранить в упаковке до тех пор, пока он не понадобится. Нейтрализатор используется в случае, если на поверхности, отбираемой пробе, имеются остатки дезинфицирующих химикатов, которые могут убить бактерии при транспортировке в лабораторию. Нейтрализатор следует выбирать после рассмотрения активных веществ дезинфицирующего средства и бактерий, которые будут проверены в лаборатории. Бульон Ди Ингли в некоторых лабораториях называется бульоном D/E или нейтрализующим бульоном Ди Ингли (DENbroth), является хорошим химическим нейтрализатором широкого спектра действия.

Конец влажного тампона следует прижать к внутренней стороне тюбика с нейтрализатором, чтобы удалить излишки нейтрализатора. Некоторые нейтрализаторы содержат низкие концентрации питательных веществ и подходят для использования в качестве среды для транспортировки в лабораторию. Однако это касается не всех нейтрализаторов, и в случае сомнений контейнер и остатки нейтрализатора следует выбросить.

Контейнер для проб запечатывается и маркируется датой, с описанием того, что было отобрано, и размером использованного шаблона. Размер площади отбора проб требуется испытательной лаборатории, если результаты представлены в формате КОЕ/см²

Пробы немедленно помещают в изолированную холодильную камеру, содержащую замороженные блоки или колотый лед. Пробы следует хранить при температуре от 0°C до 4°C (в холодном состоянии, но не замороженные). Хранение образцов в холоде предотвращает рост бактерий, а обеспечение их незамерзания предотвращает бактериальное повреждение. Поврежденные бактерии могут оказаться неспособными расти при тестировании в лаборатории. Диапазон температур от 0°C до 4°C помогает гарантировать, что полученные значения отражают уровень бактерий, присутствующих на поверхности. Образцы должны поступить в лабораторию, чтобы анализы могли начаться максимум через 24 часа после взятия.

Важно отметить, что нейтрализатор может содержать питательные вещества, способствующие росту бактерий. Таким образом, обработанную область необходимо повторно очистить и продезинфицировать.