Триптиказеино соевый агар в контактных чашках

В состав ТСА добавляют нейтрализаторы для противодействия любым противомикробным агентам, используемым в чистых помещениях. Это тематическое исследование было проведено для проверки того, что контактные чашки с питательной средой TSA облученные с  добавлением нейтрализующих агентов (Твин 80 - Лецитин - Гистидин - Тиосульфат натрия) способствуют росту наиболее распространенных контаминирующих бактерий даже в присутствии дезинфицирующих средств.

Контактные чашки с питательной средой являются стандартным инструментом  для экологического мониторинга поверхностей и персонала в чистых помещениях и изоляторах. Требуемые характеристики питательных сред описаны в ISO 14698 и представляют собой основу для валидации культуральных сред:

• Среды должны быть неселективными для обнаружения широкого спектра микроорганизмов.
• В питательную среду следует добавлять добавки для преодоления антимикробной активности в месте отбора проб.
• Внешняя поверхность контейнеров должна поддерживаться в состоянии чистоты, соответствующем их использованию.

Новые контактные чашки с замком, наполненные  ТСА и смесью нейтрализаторов, состоящих из лецитина, полисорбата 80, гистидина и тиосульфата натрия (TSA с LTHThio), упаковываются в тройные пакеты и подвергаются облучению для использования в чистых помещениях класса А или изоляторах. Благодаря специальной системе блокировки их можно использовать для аэробного и анаэробного контроля поверхностей и персонала.

Тройная упаковка и облучение позволяют безопасно переносить чашки в чистые помещения и изоляторы, снимая один слой упаковки при переходе в новое помещение с более высоким классом чистоты.  Доказано, что при использовании в изоляторах упаковочный материал непроницаем для паров перекиси водорода, что позволяет безопасно обеззараживать упакованные в чашки в изоляторе.

Характеристики чашек должны соответствовать перечисленным выше требованиям ISO 14698 и иметь эффективность нейтрализации по отношению к ряду дезинфицирующих средств, охватывающему наиболее широко используемые активные вещества.

Для валидации стимулирующих рост свойств была выбрана группа микроорганизмов, рекомендованная фармакопеей для испытаний на стимулирование роста сред ТСА, а также дополнительные тестовые штаммы, которые представляют собой часть типичной микрофлоры чистых помещений.

Наиболее распространенными микроорганизмами в чистых помещениях являются грамположительные бактерии, среди которых преобладают виды Micrococcus, Staphylococcus spp., Corynebacterium spp. И еще реже такие плесени, как Aspergillus spp. и Penicillium spp.. В настоящей валидации следующие микроорганизмы включены в тесты на стимуляцию роста, которые проводились через 0, 3, 6 месяцев хранения в рамках указанных условий хранения для трех партий питательной  среды каждая:

• Грамположительные неспорообразующие бактерии: Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 14990.
• Грамположительные спорообразующие бактерии: Bacillus subtilis ATCC 6633, Bacillus cereus ATCC 10876.
• Грамотрицательные бактерии: P. aeruginosa ATCC 9027.
• Дрожжи: Candida albicans ATCC 10231.
• Плесень: Aspergillus brasiliensis ATCC 16404.
• Анаэробный тест-штамм: C. sporogenes ATCC 11437 

Фармакопея рекомендует уровень высеваемости  50–200% для тестов на стимулирование роста по сравнению с эталонной серией. В целях валидации нижний предел приемлемости был увеличен до 70. Кроме того, тесты на стимулирование роста были также проведены для чашек, которые хранились в течение 12 месяцев в соответствии со спецификациями, включая промежуточный температурный сдвиг либо на три дня при 4 °C, либо на три дня при 40 °C. для имитации температурных пиков при транспортировке. Все тест-штаммы показывают хорошие показатели восстановления.

Поскольку контактные чашки в основном используются для оценки загрязнения дезинфицируемых поверхностей, требуется нейтрализация широкого спектра биоцидов. Концентрация остатков дезинфицирующих средств на сухих поверхностях очень низкая. Ожидается, что для неокисляющих активных веществ, таких как соединения четвертичного аммония, бис-бигуаниды, фенольные соединения и альдегиды, количество 25 мкл на контактную чашку будет сопоставимо с поверхностью, которая полностью пропитана дезинфицирующим средством и высушена.

В случае окислительно-активных агентов, особенно таких окислительных агентов, как перекись водорода и дезинфицирующие средства на основе хлора, остаточные остатки значительно меньше, чем 25 мкл дезинфицирующего средства на чашку.

В литературе сообщается об эффективной  нейтрализации стандартных нейтрализующих агентов, таких как лецитин, полисорбат 80, гистидин и тиосульфат. Использование лецитина и полисорбата 80 в качестве подходящих нейтрализаторов четвертичных аммониевых соединений, фенольных соединений, бис-бигуанидов и гипохлоритов подтверждено несколькими исследованиями. Гистидин рекомендуется для нейтрализации альдегидов, но может быть заменен аминокислотами, присутствующими в сложной культуральной среде. Тиосульфат рекомендуется для инактивации галогенов ртути, включая хлор и гипохлорит, а также альдегидов.

Для проверки эффективности нейтрализации три партии питательной среды ТСА с четыремя нейтрализаторами облучали и тестировали ростовые свойства нескольких микроорганизмов в присутствии дезинфицирующих средств и сравнивали со скоростью восстановления на необработанных чашках из той же партии. Уровень восстановления всех выбранных микроорганизмов всегда составлял > 70% в присутствии 25 мкл тестируемых дезинфицирующих средств. 

Дополнительная особенность ТСА с нейтрализаторами облученный  – длительный срок хранения 6 месяцев, что позволяет сократить входной контроль товара для пользователя. Результаты проверки свойств среды, способствующих росту, показывают очень хорошие показатели восстановления выбранных тестовых организмов, которые могут присутствовать в чистом помещении.

Это также может быть подтверждено даже после пиков температуры, которые могут возникнуть во время транспортировки. Также подтверждена вторая важная особенность - эффективная нейтрализующая активность для тестируемых активных ингредиентов, таких как спирты, альдегиды, гипохлорит, четвертичные соединения аммония, перекись водорода, надуксусная кислота, органические пероксиды, а также фенольные соединения для рабочих концентраций.